紫外-可見分光光度計的類型很多,但可歸納為三種類型:單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。
經(jīng)單色器分光后的一束平行光,輪流通過參比溶液和樣品溶掖,以進行吸光度的測定。這種類型的分光光度計結構簡單,操作方便,維修容易,適用于常規(guī)分析。
雙光束分光光度計
經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為弧度相等的兩束光,一束通過參比池,另一束通過樣品池。光度計能自動比較兩束光的強度,此比值即為試樣的透射比,經(jīng)對數(shù)變換將它轉換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。雙光束分光光度計一般都能自動記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時分別通過參比池和樣品他,還能自動消除光源強度變化所引起的誤差。
雙波長分光光度計
雙波長分光光度計的優(yōu)點:對于多組分混合物、混濁試樣(如生物組織液)的分析,以及存在背景于擾或共存組分吸收干擾的情況下,利用雙波長分光光度法,往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計,能獲得導數(shù)光譜。
紫外可見分光光度計基本定律
1852年,比爾(Beer)參考了布給爾(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所發(fā)表的文章,提出了分光光度的基本定律,即液層厚度相等時,顏色的強度與呈色溶液的濃度成比例,從而奠定了分光光度法的理論基礎,這就是**的比爾朗伯定律。1854年,杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人將此理論應用于定量分析化學領域,并且設計了**臺比色計。到1918年,美國國家標準局制成了**臺紫外可見分光光度計。此后,紫外可見分光光度計經(jīng)不斷改進,又出現(xiàn)自動記錄、自動打印、數(shù)字顯示、微機控制等各種類型的儀器,使光度法的靈敏度和準確度也不斷提高,其應用范圍也不斷擴大。
紫外可見分光光度法從問世以來,在應用方面有了很大的發(fā)展,尤其是在相關學科發(fā)展的基礎上,促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng)新,功能更加齊全,使得光度法的應用更拓寬了范圍。